DEVELOPMENT OF SOLID PHASE RADIOIMMUNOASSAY USING ANTIBODY
COUPLED MAGNETIZABLE PARTICLES
FOR MEASUREMENT OF PROGESTERONE IN HUMAN SERUM*
MEHANY, N.L.
Labelled Compounds Dept., Hot Labs. Centre, Atomic
Energy Authority, Cairo, Egypt.
Key words: Radioimmunoassay, Magnetic particles, Progesterone.
تطوير طريقة التحليل المناعى الإشعاعى ذات الطور الصلب باستخدام الجزيئات الممغنطة لقياس هرمون البروجستيرون فى مصل الدم البشرى
ناجى لحظى مهنى
خلاصـــة
استهدفت هذه الدراسة تحضير المكونات الأساسية لنظام التحليل المناعى الإشعاعى ذو الطور الصلب باستخدام الجزيئات الممغنطة وذلك بغرض استخدامها فى عمل عبوات تشخيصية للتقدير المباشر لهرمون البروجستيرون فى مصل الدم البشرى. تم تحضير الممنع لهرمون البروجستيرون وذلك باتحاد الهرمون مع بروتين نقى من الأبقار كحامل وتم حقنها فى شكل مستحلب مع Freund's adjuvant فى أرانب نيوزيلاندية وذلك لإنتاج الأجسام المضادة عديدة النسيلة وقد تم تحميل تلك الأجسام المضادة على الجزيئات الممغنطة بعد تنشيطها واستخدام هذه الجزيئات فى ذلك التقدير وأيضاً تم تحضير كل من القافى المشع بروجستيرون- يود 125 بإستخدام الكلورامين- ت والأيودوجن و المحاليل العيارية لهرمون البروجستيرون. وقد تم دراسة ضبط جودة وصلاحية هذه التقنية باستخدام الوسائل المتعارف عليها دوليا وعمليا لإثبات مدى كفاءتها فى التشخيص الاكلينيكى.
أوضحت نتائج الدراسة الحصول على طريقة قليلة التكلفة وفائقة الحساسية والإختصاصية والدقة مما يرشحها لتكون وسيلة مناسبة للتشخيص الدقيق للتبويض فى السيدات فى سن الإنجاب وبالتالى إعطاء العلاج المناسب.
ABSTRACT
The aim of the present study was to prepare solid phase radioimmunoassay (RIA) reagents. Development as well as optimization and validation of RIA system using solid phase magnetic particles for the measurement of progesterone in human serum are described. The production of polyclonal antibodies was carried out by immunizing five white New-Zealand rabbits subcutaneously. Low density magnetizable cellulose iron oxide particles have been used to couple covalently to the IgG fraction of polyclonal anti-progesterone using carbonyl diimidazole activation method and applied as a solid phase separating agent for RIA of serum progesterone. 125I-progesterone tracer was prepared using chloramine-T and iodogen oxidation methods and purified using high performance liquid chromatography. The progesterone standards were prepared using highly purified progesterone powder with hormone free serum as standard matrix. Optimization and validation of the assay were carried out. The results obtained provide a low cost, simple, sensitive, specific and accurate RIA system of progesterone based on magnetizable solid phase separation. This may be extremely helpful in diagnosis and proper management of ovulation during childbearing years.
